Pesquisadores da Unicamp (Universidade Estadual de Campinas) desenvolveram um método que permite visualizar o material genético da covid-19 dentro de células. Baseado na técnica conhecida como hibridização in situ por fluorescência, a FISH (fluorescent in situ hybridization), na qual permite visualizar o vírus nas células em três dimensões e a marcação simultânea de outros componentes celulares. “Geralmente, os laboratórios usam técnicas que permitem verificar o aumento da carga viral em uma cultura de células ou tecidos infectados, como o qPCR.
No entanto, essas técnicas não comprovam que o vírus está dentro das células ou mesmo em que parte da célula ele se instalou, o que é muito importante na compreensão da doença”, diz Henrique Marques-Souza, professor do IB (Instituto de Biologia) da Unicamp, que liderou o desenvolvimento do método. Henrique Marques-Souza, que é apoiado pela Fapesp (Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo), faz parte da Força-Tarefa covid- 19 Unicamp, que une esforços de pesquisa, insumos e recursos para a compreensão e combate à doença. Com o protocolo, desenvolvido pela pós-doutoranda Luana Nunes Santos, será possível aprofundar os estudos sobre a covid- 19 em andamento em seu laboratório, além de permitir a colaboração com outros grupos de pesquisas dentro e fora da Unicamp. “Conseguir visualizar o vírus dentro da célula é algo muito valioso para a compreensão da infecção. Isso pode também ser realizado pela MET (Microscopia Eletrônica de Transmissão) ou por ICQ (Imunocitoquímica).
A MET, porém, demanda microscópios especializados e demora entre uma semana e dez dias para ser concluída. Já a ICQ requer anticorpos que se ligam ao vírus, e é relativamente simples”, pontua. “No entanto, os insumos são caros e demoram muito para chegar por conta da alta demanda mundial provocada pela pandemia”, completa.
ENSAIOS
Na FISH, os pesquisadores sintetizam uma sonda, uma molécula de DNA que se liga ao RNA do vírus, o que permite a ligação de substâncias visíveis sob luz fluorescente. Ao entrar em contato com a célula infectada, a sonda se liga (hibridiza) especificamente com o RNA do vírus e as moléculas fluorescentes que a ela se ligam permitem a visualização da marcação em um microscópio de fluorescência. Do ponto de vista logístico, os ensaios realizados pelo laboratório da Unicamp podem ser feitos com mais agilidade, porque não dependem da importação dos kits comerciais de FISH ou dos anticorpos usados na imunocitoquímica, o que representa também um ganho econômico. Outra vantagem é que o vírus pode ser detectado precocemente, uma vez que a imunocitoquímica depende de o vírus replicar seu RNA e produzir um nível detectável da proteína viral.