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Noticias RTV (Espanha)

Coronavirus: la importancia de las pruebas a gran escala

Publicado em 14 abril 2020

Prueba masiva de la población. Esta es la recomendación de la Organización Mundial de la Salud (OMS) para enfrentar la propagación de nuevo coronavirus (Sars-CoV-2), causante de Covid-19. Para la organización, realizar exámenes a gran escala, combinados con aislamiento social, es la forma ideal de proteger a la población de la pandemia. En Brasil, dado el número limitado de pruebas disponibles, la estrategia inicialmente adoptada por el gobierno fue diferente. Los kits de diagnóstico estaban destinados solo a personas en estado grave para confirmar el contagio.

Con la propagación de la epidemia, el Ministerio de Salud anunció la distribución en las próximas semanas de aproximadamente 23 millones de pruebas rápidas para detectar la enfermedad en trabajadores de salud y seguridad y otros 14.9 millones de pruebas de biología molecular para pacientes críticos. pacientes hospitalizados y casos leves en las unidades de la Red del Síndrome de la Gripe Centinela, que monitorea la enfermedad en el país. Teniendo en cuenta el tamaño de la población brasileña, de 220 millones de individuos, y el hecho de que algunos necesitarán ser probados más de una vez, este número sigue siendo insuficiente para hacer diagnósticos a gran escala.

“Junto con el aislamiento social, las pruebas masivas para el diagnóstico de Covid-19 es la única forma de ‘aplanar’ la curva de propagación del virus en el país. Solo de esta manera es posible identificar a los infectados y aislarlos para evitar la transmisión. Este es el método más eficiente, y está siendo utilizado por países, como Corea del Sur, que han logrado aplanar la curva ”, dice el virólogo Edison Luiz Durigon, del Instituto de Ciencias Biomédicas de la Universidad de São Paulo (ICB-USP).

La prueba molecular contra el coronavirus.

El Instituto de Tecnología en Inmunobiológicos (Bio-Manguinhos), de la Fundación Oswaldo Cruz (Fiocruz), y el Instituto de Biología Molecular de Paraná (IBMP) son responsables del desarrollo y suministro de los kits de diagnóstico Covid-19 utilizados en pacientes hospitalizados. red de hospitales del Sistema Único de Salud (SUS). Los exámenes son realizados por el Centro de Salud Pública (Lacen) y los laboratorios nacionales de referencia: el Instituto Adolfo Lutz (IAL), en São Paulo, Fiocruz, en Río de Janeiro, y el Instituto Evandro Chagas (IEC), en Pará. Hasta el final En marzo, según el Ministerio de Salud, se distribuyeron más de 54,000 pruebas.

Estilo RT-PCR en tiempo real, el ensayo Bio-Manguinhos e IBMP se realiza a partir de una muestra de secreciones de la nasofaringe o la orofaringe, es decir, material obtenido del revestimiento del fondo de la nariz o la garganta con una varilla flexible (torunda).

Es una prueba de biología molecular que se ha utilizado en laboratorios desde 1983 para diagnosticar otros virus y en varias áreas de investigación. En el caso actual, detecta un fragmento del genoma del nuevo coronavirus.

“Es una técnica de alta especificidad y sensibilidad, pero depende de dispositivos específicos que necesitan ser revisados ??constantemente y de habilidades técnicas para su ejecución. También requiere la compra de material de consumo importado y de alto costo, que tarda mucho en llegar ”, explica el virólogo Paulo Eduardo Brandão, de la Facultad de Medicina Veterinaria y Ciencia Animal (FMVZ) de la USP. «Habiendo superado estas dificultades, es una prueba excepcionalmente buena».

Considerada la prueba estándar para Covid-19 en el país y en todo el mundo, es poco probable que el ensayo molecular presente falsos negativos. “Consideramos que el nivel de sensibilidad de nuestra prueba es extremadamente efectivo. Puede detectar la infección en cantidades mínimas de material genético del virus, incluso cuando la carga viral del paciente es baja ”, declara Antonio Gomes Ferreira, gerente del Programa de Desarrollo de Tecnología Reactiva Bio-Manguinhos. Según él, las pruebas moleculares basadas en la tecnología RT-PCR pueden diagnosticar la infección viral desde el primer día del inicio de los síntomas. La prueba también es efectiva en personas asintomáticas.

Normalmente, el resultado de la RT-PCR está listo en menos de 24 horas después de la recolección de la muestra, pero con la gran cantidad de pruebas realizadas en toda la pandemia en el país, este período se ha extendido. En algunos casos, lleva siete o 10 días. Un informe del portal G1 señaló que el país tenía, el 2 de abril, al menos 23 mil pruebas en espera de resultados.

El retraso causa preocupación porque, además de evitar un diagnóstico rápido de la enfermedad y la adopción del mejor tratamiento para el paciente, ralentiza la lucha contra la propagación del virus. Además, este retraso hace que el número de casos y muertes confirmados e informados por las autoridades en un día dado reflejen la situación de varios días antes: es decir, puede dar una apariencia falsa de que el número de pacientes y muertes en este momento es menor de lo que realmente es.

Para enfrentar este problema y expandir las pruebas en el país, la Agencia Nacional de Vigilancia Sanitaria (Anvisa) ha otorgado el registro en las últimas semanas para 17 nuevas pruebas en el país, 14 de las cuales son pruebas rápidas, que muestran resultados entre 10 y 30 minutos, y tres Biología Molecular. Fácil de realizar, las pruebas rápidas pueden costar hasta una cuarta parte del precio de los ensayos moleculares: el RT-PCR proporcionado por Fiocruz, por ejemplo, cuesta R $ 98.

“Las pruebas rápidas son todo lo que necesitamos en este momento. Ayudarán a controlar la pandemia, ya que pueden realizarse en cualquier hospital o clínica médica, sin depender de dispositivos sofisticados, como los utilizados para el diagnóstico por RT-PCR «, dice Durigon, de ICB-USP. “Es la única forma de realizar pruebas masivas en Brasil. Pueden llegar a la puerta de hospitales menos privilegiados, que son la mayoría en el país. Si la pandemia alcanza las clases sociales menos favorecidas, solo las pruebas rápidas pueden diagnosticar la enfermedad rápidamente. De lo contrario, estaremos en una situación tan crítica como la de Italia «.

Una opinión similar tiene el director del Instituto de Ciencias Biológicas de la Universidad de Brasilia (IB-UnB), el parasitólogo Jaime Martins de Santana. “Solo sabremos el alcance de la infección en la población brasileña con la aplicación de pruebas inmunológicas rápidas para la detección de anticuerpos en la sangre de las personas. Por ahora, con las condiciones actuales, solo estamos viendo la punta del iceberg ”, destaca.

Examen serológico

Las pruebas rápidas aprobadas recientemente por Anvisa están destinadas a hospitales, centros de salud y laboratorios de análisis clínicos; al principio, no se venderán en farmacias. Se dividen en dos grupos: serológicos y aquellos que detectan el antígeno, el virus en sí. La gran mayoría, 12, precisamente, son del primer tipo. Realizado a partir de una muestra de sangre, suero o plasma, los exámenes serológicos muestran la presencia de dos anticuerpos, inmunoglobulinas tipo M (IgM) y G (IgG), producidas por el cuerpo del paciente para combatir la infección por Sars-CoV -2.

Como la producción de IgM generalmente ocurre unos días después del inicio de los síntomas, mientras que la de IgG ocurrirá más tarde, la prueba es ideal para diagnosticar a aquellos que ya han sido infectados, con o sin síntomas; también es útil, por lo tanto, detectar pacientes asintomáticos Si se aplica en los primeros días de contaminación, cuando el individuo aún no produce anticuerpos, puede dar un falso negativo.

Por lo tanto, no está indicado para la fase aguda de la enfermedad. Para su realización, solo una gota de sangre, recolectada a través de una perforación en la punta del dedo. Mezclado con un reactivo, se aplica a una tira, como en una prueba de glucosa en sangre. Si aparece una raya en la cinta, el resultado es positivo.

La empresa Eco Diagnóstica, con sede en Nova Lima (MG), es una de las que obtuvo un registro de una prueba serológica para detectar Sars-CoV-2. “Importamos la materia prima de Corea del Sur y estamos produciendo en nuestra fábrica en Corinto, en el interior de Minas Gerais. Ya hemos producido y colocado el primer lote de pruebas de anticuerpos en el mercado. Otros serán lanzados en abril ”, dice la biomédica Mirela Gasparini, asesora científica de Eco Diagnóstica. “Es como una prueba de embarazo; lee de líneas que aparecen en una cinta «.

En Curitiba (PR), la startup Hi Technologies también se está preparando para proporcionar una prueba de detección de anticuerpos para el nuevo coronavirus. «La prueba la realiza Hilab, un laboratorio portátil creado por nosotros en 2017. Dentro del dispositivo, hay una cápsula con el reactivo de acuerdo con la prueba realizada, en este caso, con la prueba Covid-19», explica Marcus Figueiredo, CEO de Hola tecnologias

Después de recolectar dos gotas de sangre del dedo, el dispositivo realiza una lectura digital de la muestra y la envía a través de la nube al laboratorio de la compañía en Curitiba. Allí, el análisis se realiza, utilizando inteligencia artificial, por los profesionales de la salud que firman y envían el informe al teléfono celular del paciente en cuestión de minutos. La expectativa de la compañía es hacer que la prueba esté disponible desde mediados de abril a un precio de alrededor de R $ 130, una cantidad más alta que la de la mayoría de las pruebas rápidas.

Otra prueba serológica lanzada por Anvisa es el MedTeste Coronavirus IgG / IgM, vendido en Brasil por el distribuidor de productos y equipos médicos y hospitalarios MedLevensohn, de Río de Janeiro. El kit está fabricado por la compañía farmacéutica china Biotest y, según MedLevensohn, ya se está utilizando en 12 países, incluidos Alemania, Francia, Italia y el Reino Unido. Se importaron 1 millón de pruebas, que también se realizan en base al análisis de una gota de sangre.

Prueba de antígeno

El segundo grupo de kits de diagnóstico rápido lanzado por Anvisa son las pruebas de antígeno. Se realizan a partir de secreciones recolectadas de la nariz o la garganta de los pacientes, la misma muestra recolectada de la nasofaringe u orofaringe utilizada en ensayos moleculares. «La diferencia es que, mientras que la RT-PCR demuestra la presencia de ARN Sars-CoV-2 en la muestra, las pruebas que detectan los antígenos virales revelan que las proteínas específicas del virus circulan en el cuerpo», explica el virólogo Paulo Brandão, de USP.

Al igual que con las pruebas serológicas, pueden presentar falsos negativos si se realizan muy temprano en la enfermedad, cuando la carga viral aún es baja y el individuo no ha mostrado síntomas. “Esta prueba es ideal para la fase aguda de la enfermedad. Para que sea efectivo, el virus debe replicarse en el cuerpo. La prueba que utiliza la técnica RT-PCR puede detectar el virus incluso antes de que comience a multiplicarse. Por esta razón, se considera más sensible ”, dice Mirela Gasparini, biomédica, de Eco Diagnóstica.

El período de incubación de Sars-CoV-2 varía de dos a 14 días, con un promedio de 5 días. La compañía minera planea comercializar las dos únicas pruebas de antígeno lanzadas hasta ahora por Anvisa. La capacidad de producción de la compañía, incluida la prueba serológica, es de 40 mil pruebas por día: Eco Diagnóstica no reveló el valor de cada una.

Para los expertos, siempre que hayan demostrado la estandarización y la validación, las pruebas rápidas que comienzan a aplicarse en el país serán un recurso importante para combatir la pandemia. Además, serán esenciales para tener una imagen más real de la contaminación de la población y la mortalidad asociada con Sars-CoV-2. Cuantas más pruebas se realicen y, en consecuencia, se notifiquen más casos, mayor será la base de personas infectadas, lo que reduce la tasa de letalidad del virus, ahora alrededor del 5%. En un escenario de subregistro como el que ha estado ocurriendo en Brasil, el virus puede parecer mucho más letal de lo que realmente es.

Esfuerzo científico

El esfuerzo para aumentar la disponibilidad de pruebas en el país es compartido por los laboratorios universitarios. Los científicos del Instituto Alberto Luiz Coimbra para Estudios de Posgrado e Investigación de Ingeniería de la Universidad Federal de Río de Janeiro (Coppe-UFRJ) están trabajando para crear una prueba para detectar anticuerpos en personas sospechosas de Covid-19. Planean desarrollar dos pruebas, una rápida y otra un análisis inmunoenzimático (Elisa), similar a los análisis de sangre que se realizan para detectar la presencia de anticuerpos contra los virus de la hepatitis y el VIH.

«Utilizamos tecnología de ADN recombinante para desarrollar una proteína de pico viral [as pontinhas ao redor do vírus], llamada proteína S [de spike, espinho, em inglês], para crear la prueba. Ya hemos logrado producirlo y purificarlo. Esperamos que las pruebas sean validadas con muestras reales de personas infectadas en aproximadamente 30 días ”, dice la ingeniera química Leda Castilho, coordinadora del Laboratorio de Ingeniería de Cultivo Celular en Coppe. Es una de las líderes del trabajo junto con Amilcar Tanuri y Orlando Ferreira, del Laboratorio de Virología Molecular del Instituto de Biología de la UFRJ.

Según Castilho, el resultado de la prueba rápida debería salir en unos minutos, mientras que Elisa estará listo en unas pocas horas. “Elisa es ampliamente utilizada en laboratorios de análisis clínicos en Brasil y el mundo. La ventaja es que necesita una estructura mucho menos sofisticada que la de las pruebas de RT-PCR ”, destaca el investigador. Una vez que la proteína Coppe-UFRJ está lista, la idea es que las empresas interesadas se hagan cargo de la producción de los kits. «Apostamos por ambos formatos porque queremos que sea posible producir el mayor número de pruebas en el menor tiempo posible», enfatiza Castilho.

En São Paulo, investigadores de la USP y la Universidad Estatal de Campinas (Unicamp) también están trabajando para desarrollar una prueba rápida para Covid-19, basada en el patrón de moléculas en los fluidos corporales. La investigación está dirigida por Rodrigo Ramos Catharino, del Laboratorio de biomarcadores Innovare de Unicamp. «Ya hemos enviado el proceso de aprobación a Conep [Comissão Nacional de Ética em Pesquisa, órgão que regulamenta estudos clínicos no Brasil] y estamos haciendo un análisis previo y procesando los datos. Todo al mismo tiempo, debido a la situación ”, dijo Catharino a Agência Fapesp.

Las muestras tomadas se analizan en un espectrómetro de masas, un dispositivo que muestra los metabolitos en los fluidos corporales. Luego, los resultados, tanto de pacientes infectados como de personas sanas, utilizados como controles, son analizados por herramientas de inteligencia artificial, en el Instituto de Computación de la Unicamp. El objetivo es que el programa de computadora pueda discernir entre los que están sanos sin el virus, los infectados con síntomas leves y los que se consideran en estado grave.

USP participa en la investigación reclutando voluntarios y recolectando muestras. En una entrevista con Agência Fapesp, Rinaldo Focaccia Siciliano, profesor de la Facultad de Medicina de la USP y médico asistente de la División de Enfermedades Infecciosas y Parasitarias del Hospital das Clínicas (HC), informó que los participantes serán seleccionados de pacientes ingresados ??en el HC y el Hospital Municipal da Lapa, en São Paulo, con síntomas parecidos a la gripe. El grupo espera que la prueba esté lista en mayo y cueste alrededor de R $ 40.

La Universidad de Brasilia (UnB) también participa en la lucha contra el nuevo coronavirus. Mediante un acuerdo firmado con el Departamento de Salud del Distrito Federal, la institución puso a disposición sus laboratorios para realizar pruebas de diagnóstico de la red pública.

Según el parasitólogo Jaime Santana, de la UnB, ya se han asignado tres máquinas para realizar pruebas de PCR del Instituto de Ciencias Biológicas al Laboratorio Central de Salud Pública en el Distrito Federal y hay otras tres disponibles. “Con el préstamo del equipo, la capacidad de diagnóstico de Lacen-DF aumentó de 250 a 600 pruebas por día. Y puede aumentar aún más, a 1,000 exámenes diarios ”, informa Santana.

* Este texto fue publicado originalmente por Pesquisa FAPESP.