Pesquisadores da Universidade Estadual de Campinas (Unicamp) desenvolvem um método que permite visualizar o material genético de novos coronavírus (Sars-CoV-2) dentro das células, em 3D.
Baseado na técnica conhecida como hibridização no local por fluorescência – FISH (fluorescente no local hibridização) -, ele permite visualizar o vírus nas células em três dimensões e marcar simultaneamente outros componentes celulares.
“Os laboratórios usam técnicas que permitem verificar o aumento de carga viral em uma cultura de células ou tecidos infectados, como o qPCR”, explicou Henrique Marques-Souza, professor do Instituto de Biologia da Unicamp que liderou o desenvolvimento do método.
“No entanto, essas técnicas não comprovam que o vírus está dentro das células ou o mesmo na parte do célula que ele instalou, o que é muito importante na compreensão da doença”, afirma o professor.
Marques-Souza, que é apoiado pela Fapesp (Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo), faz parte da tarefa-força Covid-19 Unicamp, que realiza pesquisas, insumos e recursos para combate e doença.
Com o protocolo, desenvolvido pelo pós-doutorado Luana Nunes Santos, será possível aprofundar os estudos sobre o novo coronavírus em andamento em seu laboratório, além de permitir a colaboração com outros grupos de pesquisa dentro da Unicamp.
“Conseguir visualizar o vírus dentro da célula é algo muito valioso para a compreensão da infecção”, afirma Marques-Souza.
“Isso também pode ser realizado pela microscopia eletrônica de transmissão [MET] ou por imunocitoquímica [ICQ]. A MET, porém, exige microscópios especializados e demora entre uma semana e 10 dias para ser concluído. Já o ICQ exige que seja vinculado ao vírus e é relativamente simples. No entanto, os insumos são caros e demoram muito para chegar por conta da alta demanda mundial provocada pela pandemia ”, explica.
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Na técnica FISH, os pesquisadores sintetizam uma sonda – uma molécula de DNA que liga o RNA ao vírus -, ou permite uma ligação de substâncias visíveis sob luz fluorescente. Ao entrar em contato com uma célula infectada, uma sonda se liga (hibridização), é aplicável a RNA de vírus e moléculas fluorescentes que podem ligar-se a respostas de marcação em um microscópio de fluorescência.
O ponto de vista logístico, os testes realizados pelo laboratório da Unicamp podem ser feitos com mais agilidade, porque não depende da importação de kits comerciais de PEIXES ou dos usados ??na imunocitoquímica, ou que também representa um ganho econômico.
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Outra vantagem é que o vírus pode ser detectado precocemente, uma vez que a imunocitoquímica depende do vírus replicar seu RNA e produzir um nível detectável da proteína viral.
Como imagens em três dimensões (veja vídeo) feitas até agora mostram que o vírus se replica no próximo núcleo da célula, provavelmente se instalando em alguma organização específica, como o endossomo.
Os pesquisadores estão aplicando uma técnica para responder a diferentes questões sobre o mecanismo de infecção do novo coronavírus. Os primeiros resultados estão próximos de serem usados ??para publicação.
O trabalho também abre caminho para a aplicação no estudo de outros vírus, inclusive para rastrear paralelos entre eles e o Sars-CoV-2.
“Tudo o que descobrir sobre o vírus dentro da célula pode mudar para comparar com outros vírus mais comuns, como a queixa. Com isso, talvez seja possível entender por que o novo vírus é tão agressivo ”, diz Marques-Souza.
Embora não seja o foco no momento, o trabalho também pode resultar no desenvolvimento de um novo teste de detecção de vírus no futuro.
O novo protocolo foi testado em células Vero, originárias da borda do macaco, modelo mais usado em estudos de coronavírus. Os testes também foram bem sucedidos em células pulmonares e em outras células humanas.
* com informações da agência Fapesp